Распознанный текст
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
„„ЯО„„1428384 А 1
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ; ,
Н А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
(71) Институт биоорганической химии
АН БССР
(72) В. М. Гузов, А. И, ПетрашинС, А. Усанов и В. Л. Чащин
(56) цщегв Я е1 а., . 1. аз. Си, Мес(, 1981м. 98, № 1, р. 30 — 36.
(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГАГ1ТГ. НОВ
(57) Изобретение относится к биохимии. Цель изобретения — упрощение способа и сокращение времени определения. После инкубации исследуемого образца,меченого гаптена, антисыворотки и суспензии клеток стафилококка аигецв проводят центрифугироьание. Промывают осадки, помешают пробирки с осадками в гамма-счетчик и измеряют количество импульсов. Способ позволяет определить стельность коров по концентрации прогестерона в молоке.
форлу, а изобретения
Изобретение относится к медицинской биохимии, а именно к способу определения гаптецов, ц может быть использоваго при диагностике различных патологических и физиологических состояний организма человека и животных, а также в научных исследованиях и биотехнологических процессах (цапример, получение стероидов с помощью фермецтативцых реакторов) при определении микроколичеств биологически активных вецесв в жидкостях, не содержащих значительцьх количеств иммуноглобулинов группы 6.
(е, ь изобретения — упрощение определения гдпецд и сокращение времени анализа.
При. ер1. Определение количества 51ацгсцз, необходимого для выполнения радиоигр унхоги1еского анализа про ес сроц.Все определения дублируются.
, Доб всяот в пробирки растворы реагец ов”.
бхфер Л (0, 15М С, х, Ч; -), ГГЛ, 50 мМ фосфд иый буфс р, ), 02„, Х. р 7, 4)0, 1: мл; , 1-прогссг гц.
цу, евой с ацдарт (у(ц р А ц, ц цс содержапсе црогестероцд ксрнье мо, ко, разведенное дцстиллировдццоц водой в сооцоценци 1: 5)0, 1 мл; ди цсывороткд кролц кс яроги к(ньюгст ц ро сс Ге)о ц оыч ц ц спорото цьй альбумиц ВСА) в разве. с— цци, еобхО, хОх д, я св5Зывс ния 40-Ь)”, ц вцсцмого, 1-прогестероцд,О, мл;
суспсгзия клеток. ацгепв и буфере В (О Зог ТВИН-20,0, 4, холдт,О, 5 М. хС, мМ ЭДТА, 50 мМ фосфатцый буфер,0, 02, 4 Ма Х1, р Н 7, 4), содержа цд я0, 001;
0, 005; 0, 01; 0, 005; 0, 5; 0, 75; 1 илц 5 мг бактериальцых клеток вО, мл,0, 1 млВ пробирки для определения цссцецифического связывания вместо дцтис1воротки добавляют буфер А.
Содержимое всех пробирок тщательно перемешивают, и пробирки инкубцруют 4 ч при комнатной температуре. После инкубации пробирки центрифугируют 15 мин 2000 р, промывают осадки один раз0, 5 ыл буфера В. Все пробирки с осадками помещают в гамма сетчик и измеряют количество импульсов в каждой пробирке в течение 1 мин. Рассчитывают среднее арифметическое значение (х) количества импульсов для каждой пары пробирок.
Определяют величину ВТ 100О4 для каждой дозы иммуносорбента, где  — связанная радиоактивность, импмин; Т вЂ” общая радиоактивность, импмин.
В линейных координатах строят график зависимости ВТ 1ООЯ от количества добавленных клеток Я. ацгецз. По этому графику определяют количество клеток Я. ацгецз, достаточное для полного отделения связанного антителами и свободного гаптена (0, 5 мл). Присутствие в среде инкубации молока не влияет на эффективность отде5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55
леция комплекса гаптена — антитело от свободного гаптена.
Пример 2. Определение времени инкубации, необходимого для выполнения анализа.Все определения дублируются.
Добавляют в пробирки растворы реагентов, как в примере 1, но добавляют во все пробирки по0, 1 мл суспензии с концентрацией0, 5 мг клеток (0, 1 мл), а в качестве нулевого стандарта используют коровье молоко, разбавленное дистиллированной водой в соотношении 1: 5. Содержимое пробирок тцательно перемешивают и пробирки инкубируют0, 5; 1; 1, 5; 2; 2, 5; 3; 3, 5; 4;
4, 5; 5 ч при комнатной температуре, после чего обрабатывают, как в примере1.
В линейных координатах строят график зависимости ВТ 1ООЯ от времени инкубации. Равновесие в системе наступает через 4 ч.
Пример 3. Построение стандартной кривой.Все определения дублируются.
В пробирки добавляот растворы рсасцтов, как в примере 2, цо добавляют не только нулевой стандарт, а и растворы стандартов прогестерона, содержащие 1, 6; 6,3;
123; 25; 50 нг прогестерона в мл. 1осле ицкубдции в течение 4 ч пробирки обрабатывают, кдк в примерах 1 и 2. Определяот величину ВВ 100Я для каждого стдцдрт, где В связаццая радиоак. цвцоть в пробирках, содержащих стандартные количества прогестерона, импмиц; Вц связанная радиоактивность в пробирках, содексГццх цу, евой стоцддрт, цмпин.
В линейных коооди натах строят стандартную кривуо, откладывая по оси координат значение ВВ, 100Я, а по оси абцисс— концентрацию стандартов прогестерона в нгмл.
В отличие от известного предлагаемый способ позволяет избежать предварительной длительной инкубации бактерий с дцтисывороткой и тем самым сократить время анализа на 1 сут. Поскольку реакция с днтнтелом достигает равновесия, нет необходимости вводить стадию остановки реакции. Одцостадийность процедуры анализа уменьцгает вероятность ошибки оператора.
Предлагаемый способ позволяет определять концентрацию гаптенов в буферных растворах (например, в сыворотке крови после экстракции или при синтезе стероидов в ферментативных реакторах) и в молоке (например, при определении концентрации прогестерона в молоке с целью определения стельности у коров).
Способ определения гаптенов, включающийинкубирование исследуемого образца, меченого гаптена и специфических антител с разделением свободного и связанного гаптена с помощью клеток Яарйуососсцз ацгецз,
Составители Г. Крюкова
Редактор Н. Яцола Техред И. Верес Корректор Г. Решетник
Заказ 50649 Тираж 655 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 45
Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4
отличающийся тем, что, с целью упрошения способа и сокрашения времени определения, инкубирование исследуемого образца,меченого гаптена, специфических антител осуше
ставляют одновременно с клетками карпуо
соссцв ангелов.
Похожие патенты
ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советскии Социалистическкк Республик (6 ) Дополнительное к авт. свнд-ву(22) Заявлено16, 02. 80 (21) 324766828-13 с присоединением заявки № 3Ъаударстоеииый комитет (23) Приоритет Опубликовано 23, 09. 82. Бюллетень №35 Дата опубликования описания 23. 09. 82 ао делом изобретеиий и открытий (72) Авторы изобретения Институт биологической физики АН СССР (7) Заявитель (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГАПТЕНОВ ного раствора содержащего гаптеныа также. использованием дорогостоящего оборудования для регистрации радиоактивности и меченых радиоактивной меткой препаратов. В целом на процедуру определения затрачивается 24-48 чНаиболее близким к предлагаемому является способ количественного определения гаптенов путем торможения гаптеном реакции антигена с антигаптеновым антителом, согласно которому используют конъюгированный на поверхности корпускулярной частицы эритроциты, частицы латекса или полимера антиген 21Недостатками известного способа являются длительность процесса (1520 ч), обусловленная низкой скоро20 стью оседания эритроцитов после...
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических Республик (61) Дополнительное к авт, свид-ву (22) Заявлено 210979 (21) 282077728-13 с присоединением заявки Йо (23) Г)рноритет Опубликовано 070931. Бюллетень Ко 33 Дата опубликования описания 100981 Государственный комитет но делам изобретений и открытий (72) Авторы изобретения Г. Р. Гаэизова, Р. Е. Самойлова, А. А. Аб и Ф. Р. Рахимова (71) Заявитель Казанский научно-исследовательский и микробиологии (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ ДИФТЕРИИНОГО ТОКСИНА антибиотиков) с десятикратным шагом от 10 " до 10 ". По 1 мп каждого разведения токсина вносят в 4 пробирки с клеточной культурой. Для контроля клеточной культуры 8 пробирок оставляют без токсина, заменив ростовую среду на поддерживающую. Штатив с опытными и 4 контрольными пробирками помещают в рефрижератор с температурой 10С на 3 ч для синхронизации клеточной культуры. Остальные 4 контрольные пробирки (беэ токсина) сразу ставят в термостат при 37 С. После проведенной синхронизации клеточные культуры переносят в термостат при 37 С. Через б ч (т. е. через 3 ч после окончания...
СОЮЗ СОВЕТСКИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ РЕСПУБЛИН ВСГж-я ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГЫГ.; „1 наблюдения за протеканием беременности, выявления гинекологических заболеваний человека и животных и исследовательских целей. Цель изобретения — сокращение времени анализа до 3-4 ч и его упрощение. Для этогопредложен способ псевдогомогенного иммунофермецтного определения прогестерона в сыворотке крови человека и животных, заключающийся в том, что свободный прогестероц и прогестероцмеченный пероксидазой хрена, ицкубируют с ацтителами к прогестероцудобавляют к смеси полиэтиленгликоль 6000 (ПЭГ 6000), центрифугируют и в осадке определяют активность связанной пероксидазы по окислению ортодианизидица перборатом натрия или перекисью водорода. По калибровочной зависимости находят коцентрацию прогестерона, Способ позволяет безэкстракционным путем определять микрооличества прогестерона и сократить время анализа. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (71) Институт биоорганической химии АН БССР (72) В. Д. Артемчик, М, И. СавенковаД. И. Метелица, В....
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических Республик (б1) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 17. 04, 74 (21) 201729115 с присоединением заявки Мо (23) Приоритет Опубликовано 15, 04, 76. Бюллетень М 14 Дата опубликования описания 09. 09. 76 (51) М. Кл, зА 016 700 Государственный комитет Совета Министров СССР, по делам изобретений и открытий (72) Авторы изобретения В. С. Радцев, М, С. Осокин и Н, П, Чист (71) Заявитель Уфимский филиал Всесоюзного научно-исследов института химических средств защиты растений (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА КЛЕТОК В РАСТИТЕЛЬНЫХ ТКАНЯХ Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к физиологии растений, а именно к способу определения количества клеток в растительных тканях. Известен способ мацерации ткани клеток, заключающийся в том, что кусочек ткани, например кончики корней, погружают в 5О-ную хромовую кислоту и выдерживают в течение 17 — 24 ч, затем количество клеток в мацеранте подсчитывают в счетных камерах под микроскопом. Недостатками известного способа являются длительность и сложность его проведения;...
«6«о« ««. "««««Л н. но-т э. "ччеоКаЮ ч "«рн 1фев Сотов Советскик Социалистические Республик ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. сзид-ву— (22) Заявлено 19, 11. 73 (21) 198032(28-13 с присоединением заявки— (23) Приоритет— Опубликовано 05. 11, 75. Бюллетень М 41 Дата опубликования описания 25. 08. 76 (51) М. Кл. С 121 1, ОО Государствениык комитет Совета Министров СССР ло делам изобретений и открытии (72) Авторы изобретения В. Н, Карнаухов, Е, В. Мельникова и С, Б. Петрикевич Институт биологической физики АН СССР (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ Предмет изобретения Изобретение относится к микробиологической промышленности. Иззестны способы определения жизнеспособности бактериальной культуры, для чего к ней добавляют раствор трифенилтетразолий 5 хлорнда, затем уксусной кислоты, извлекают толуолом образовавшиеся гранулы формазача, проводят их количественное определение прп помощи фотоколориметрии10 С целью, повышения эффактизностл способа предложено к суспензии грамотрицательных микроорганизмов добавлять...
